植物DNA 提取技術(shù)介紹 （DNeasy Plant Mini Kit）
簡(jiǎn)介：
從植物細(xì)胞、組織或真菌細(xì)胞樣本中分離總DNA，產(chǎn)量可達(dá)30 μg
1.高純度DNA，無污染物和酶抑制劑
2.快速純化得到即用型DNA
3.無需有機(jī)抽提，無需乙醇沉淀
DNeasy Plant Mini Kit通過基于硅膠膜的離心柱形式，可快速便捷的純化DNA。常規(guī)產(chǎn)量為3–30 μg高品質(zhì)DNA，產(chǎn)量取決于樣本來源。DNeasy Plant Mini Kit的DNA純化過程可在QIAcube全自動(dòng)核酸純化儀上自動(dòng)化進(jìn)行。
詳細(xì)信息：
性能
DNeasy Plant Maxi Kit可快速高效的純化高品質(zhì)DNA，可以從不同種類的植物和組織樣本中進(jìn)行純化，包括較難處理的樣本來源（參見"Selection of plant species processed with DNeasy Kits"）。樣本可以是新鮮、冷凍或者風(fēng)干的。優(yōu)化的DNeasy Plant操作流程與QIAshredder Maxi離心柱結(jié)合使用，獨(dú)特的過濾和勻質(zhì)柱，能夠有效的去除細(xì)胞碎片并且優(yōu)化裂解后的樣本處理流程。
用DNeasy Kits處理的植物種類簡(jiǎn)表
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Abies alba（銀杉） |
Nicotiana tabacum（煙草） |
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Aesculus hippocastanum（七葉樹） |
Oryza sativa（水稻）4 |
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Arabidopsis thaliana（擬南芥） |
Pelargonium sp.（天竺葵）4 |
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Avena sp.（燕麥） |
Petunia sp.4 |
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Brassica napus（油菜） |
Pinus sylvestris（歐洲赤松），P. brutia5 |
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Brassica oleracea（大頭菜） |
Populus tremula（白楊） |
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Chicorium endivia（菊苣） |
Pseudotsuga menziesii（Douglas 冷杉） |
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Citrullini lanatus（西瓜） |
Quercus robur, Q. petrea（橡樹）6,7 |
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Egeria sp. |
Rhododendron sp.2,4 |
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Fagus sylvatica（櫸木）1 |
Rubus idaeus（覆盆子） |
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Helianthus spp.（向日葵） |
Solanum tuberosum（土豆） |
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Hordeum vulgare（大麥）2 |
Sphagnum palustre（苔） |
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Humulus sp.（酒花） |
Spinacia oleracea（菠菜） |
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Hydrilla sp. |
Taxus baccata（紅豆杉） |
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Kalanchoe spp. |
Triticum aestivum（小麥）4 |
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Lupinus sp. |
Ulmus glabra（榆樹）6 |
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Lycopersicon esculentum（番茄）3 |
Vitis spp.（葡萄）6 |
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Myriophyllum sp. |
Zea mays（玉米） |
幼葉或針葉（以及其他組織，如上）收集并立即速凍。使用DNeasy Plant Mini Kit進(jìn)行DNA提取。1山毛櫸、2干葉、3愈傷組織、4年植物上的葉子、5胚乳、6富含碳水化合物的老樹葉、7芽。包括真菌在內(nèi)的其他物種的DNA提取的詳細(xì)信息，請(qǐng)聯(lián)系QIAGEN公司的技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐慕?jīng)銷商。
常規(guī)產(chǎn)量為3–30 μg，樣本量達(dá)100 mg濕重，洗脫體積為50–400 μl。DNA產(chǎn)量因種類和組織的不同而不同，取決于基因組大小、倍體、細(xì)胞數(shù)量和組織樣本的年齡。較低和較高的范圍值分別對(duì)應(yīng)擬南芥和小麥。
DNeasy Plant操作流程制備純核酸，無多糖和其他使用常規(guī)方法純化產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物。這些雜質(zhì)可能會(huì)干擾分光讀數(shù)并抑制酶反應(yīng)。DNeasy純化的DNA的吸光度掃描在260 nm處顯示對(duì)稱峰，證明DNA無酶抑制劑等雜質(zhì)。DNeasy純化的DNA最長(zhǎng)為40 kb。純化的DNA可用于多種應(yīng)用。
原理
DNeasy Plant Kits使用先進(jìn)的硅膠膜技術(shù)和簡(jiǎn)單的離心操作流程從植物組織和細(xì)胞或者真菌中提取高純度的細(xì)胞總DNA。DNeasy技術(shù)取代繁瑣的DNA提取操作流程，如十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）、苯酚或者氯仿萃取。使用DNeasy操作流程不需要乙醇沉淀，純化的DNA可以直接使用。DNeasy樣本制備技術(shù)已經(jīng)過認(rèn)證。
操作流程
首先對(duì)樣本進(jìn)行機(jī)械攪拌，然后進(jìn)行化學(xué)裂解。在裂解過程中，RNA被RNAase消化去除。細(xì)胞碎片、沉淀的蛋白質(zhì)和多糖都被去除，并且樣本通過QIAshredder Maxi離心柱并離心實(shí)現(xiàn)勻漿。調(diào)節(jié)緩沖溶液條件，并將裂解產(chǎn)物上樣到DNeasy Plant Maxi離心柱中。在短暫的離心過程中，DNA選擇性結(jié)合到硅膠膜上，污染物通過。余下的污染物和酶抑制劑經(jīng)過一或者兩步高效的洗滌步驟去除。然后，用水或者低鹽緩沖溶液將純化的DNA洗脫，待用。
應(yīng)用
DNeasy Plant Mini Kit適用于從植物組織中純化DNA，包括：
植物細(xì)胞
植物組織
真菌
技術(shù)參數(shù)：
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特點(diǎn) |
參數(shù) |
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Applications |
PCR, real-time PCR, blotting |
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Elution volume |
50–400 μl |
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Format |
Spin column |
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Main sample type |
Plant samples |
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Processing |
Manual |
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Purification of total RNA, miRNA, poly A+ mRNA, DNA or protein |
DNA |
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Sample amount |
<100 mg |
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Technology |
Silica technology |
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Time per run or per prep |
<1 hour |
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Yield |
3–30 μg |
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